Инновационная деятельность

Разработка относится к фармакологии и биотехнологии, в частности к получению высоко-активного противовирусного ферментного препарата, обладающего ДНКазной активностью, который может быть использован в медицине, ветеринарии, а также в исследовательских целях. Дезоксирибонуклеаза гепатопанкреаса краба может быть использована в качестве медицинского ферментного препарата для лечения аденовирусных и герпесных заболеваний глаз, верхних дыхательных путей, а также гнойных и некротических патологий. В биотехнологии - для получения олигонуклеотидов, нуклеотидов и нуклеозидов. В качестве биохимического препарата для специфической фрагментации одноцепочечной ДНК и при исследовании конформации двухцепочечной ДНК. В России ранее выпускался медицинский препарат "Дезоксирибонуклеаза", получаемый из поджелудочной железы крупного рогатого скота. Аналоги закупаются за рубежом, препараты содержат только дезоксирибонуклеазу (Pancreatic dornase, Dornavac и др.) или выпускаются в комплексе со стрептокиназой - Варидаза.

Среди различных веществ, выделяемых из морских организмов, особый интерес представляют ферменты, которые в силу особенностей условий обитания морских организмов, их более низкой эволюционной организации, дополняемой значительным видовым разнообразием этих животных, отличаются от аналогичных ферментов наземных животных. Среди свойств, определяющих перспективность применения ферментов морского происхождения в различных областях биотехнологии и медицины, могут быть выделены такие как: устойчивость к денатурации под воздействием температуры и высоких концентраций солей, высокая удельная активность и специфичность к тонким особенностям структуры биополимеров и, наконец, меньшая чувствительность по отношению к природным ингибиторам, присутствующим, как правило, в тканях и жидкостях человека. В результате систематических исследований нуклеаз из морских организмов, было обнаружено, что один из морских гидробионтов является перспективным источником для выделения целого ряда нуклеолитических ферментов, среди которых особый интерес представляет Ca,Mg-зависимая ДНКаза. Разработана технология на получение ферментного препарата, исследованы его свойства, утверждено ТУ на сырье, выпущены опытные партии фермента, определены возможности использования фермента в генной инженерии, биотехнологии и медицине. Получение ферментного препарата достигается введением дополнительных стадий очистки в ранее используемый способ получения препарата "Коллагеназа КК" (патенты РФ 2039819, С 12 N 9/48, 20.07.95), включающий гомогенизацию гепатопанкреаса промысловых крабов в буферных водных растворах, автолиз, флокуляцию, отделение нерастворимого материала фильтрацией, ультра-фильтрацию на мембранах, после чего полученный комплексный ферментный препарат содержащий гидролазы дополнительно освобождают от балластных белков, раствор центрифугируют и пропускают через полые волокна, отсекающие вещества с молекулярной массой больше 50 кДа и меньше 10 кДа, белки, проходящие через мембрану, концентрируют, стерилизуют и лиофильно высушивают. Ферментый препарат стабилен при хранении при 4 С. Выделение можно проводить при комнатной температуре.

В связи с распространением синдрома "коровьего бешенства", в настоящее время препараты, получаемые из органов крупного рогатого скота, необходимо освобождать от BSE и TSE бел-ков и предоставлять сертификат, подтверждающий их отсутствие в получаемом препарате. В про-дуктах, выделенных из морских организмов, подобные белки отсутствуют. Нами предлагается в сравнении с существующими аналогами способ получения нового высокоактивного противовирусного ферментного препарата "ДНКаза КК" из морского сырья, в котором нет белков сопутствующих синдрому коровьего бешенства, упрощение процесса выделения введением дополнительной стадии, за счет чего удается изъять из процесса экологически грязные органические и неорганические соединения, а также повысить выход целевого продукта. В качестве исходного сырья для получения препарата "ДНКазы КК" можно использовать как гепатопанкреас промысловых видов краба, так и/или полиферментный комплекс из него же, что позволяет исключить наиболее трудоемкие и масштабные стадии и упростить способ получения целевого продукта. Использование предлагаемой технологии позволяет сократить расходы как на производство самого фермента, так и производство других БАВ с его использованием, более полно использовать океанические ресурсы.

Разработана технология на получение ферментного препарата, исследованы его свойства, утверждено ТУ на сырье, выпущены опытные партии фермента, определены возможности исполь-зования фермента в генной инженерии, биотехнологии и медицине. Для биохимических и биотех-нологических целей "ДНКаза КК" может быть выделена с разной степенью чистоты из полифер-ментного комплекса или "Коллагеназы КК", а в гомогенном состоянии с применением традиционных биохимических методов.

Передача технологий и совместное производство по получению БАВ с использованием биохимического препарата ДНКазы, а также продолжение фармакологических испытаний для по-лучения фармакопейной статьи для медицинского препарата ДНКазы. Сырье, необходимое для производства биохимических и медицинских препаратов, является относительно дешевым отхо-дом производства рыбоперерабатывающей промышленности. Организация такого производства создает основу для комплексной переработки океанического сырья и расширяет ассортимент Российских фармакопейных препаратов.