1. Авторы разработки:

Балабанова Лариса Анатольевна, к.б.н., н.с. лаборатории морской биохимии ТИБОХ ДВО РАН (balaban@piboc.dvo.ru) тел. 2310603;

Голотин Василий Александрович ДВГУ, кафедра генетики и селекции тел. 2310603; Рассказов Валерий Александрович, к.б.н., заведующий лаборатории морской биохимии ТИБОХ ДВО РАН (raskaz@piboc.dvo.ru), тел. 2311635.

Организация-разработчик: Тихоокеанский институт биоорганической химии ДВО РАН, 690022, проспект 100-летия Владивостока, 159, piboc@eastnet.febras.ru, факс:(423) 2314050.

2. Основные области применения и перспективные отрасли промышленности, в которых возможно эффективное внедрение даной разработки:

Благодаря своей высокой активности и устойчивости к модификациям ЩФ из морской бактерии Halomonas marina может применяться не только в традиционных областях, но также пригодна для получения конъюгатов и может быть использована как в иммуноферментном анализе, так и генно-инженерных исследованиях.

3. Техническое описание

Для получения рекомбинантной ЩФ будут использоваться методы молекулярной генетики, генной и белковой инженерии, такие как полимеразная цепная реакция, конструирование гибридных молекул ДНК in vitro, химерогенез, секвенирование ДНК, гетерологическая экспрессия генов, а также традиционные биохимические методы - ионообменная и аффинная хроматографии, ДСН-ПААГ электрофорез, высокоэффективная жидкостная хроматография, газожидкостная хроматография. В результате полученные рекомбинантные белки ЩФ и/или его мутанты, включая химерные конъюгаты, будут предложены в качестве коммерческих препаратов для целевого использования.

4. Преимущества предлагаемого проекта, разработки, технологии по сравнению с известными.

Щелочная фосфатаза (ЩФ) - широко используемый фермент в различных прикладных областях. Halomonas (ранее Deleya) marina синтезирует внутриклеточную мономерную ЩФ с уникально высокой удельной активностью - более 10 000 ед./мг белка. диэтаноламинном буфере при pH 10,3 в отсутствие катионов двухвалентных металлов. Фирма Sigma выпускает более 45 щелочных фосфатаз из более чем 20 источников (самая активная - не более 6000 ед., цена - около $ 300 за 1000 единиц активности). Ближайшим аналогом нашего фермента (26% идентичности структуры) является термочувствительная димерная ЩФ из арктической креветки стоимостью 85 евро за 500 у.е. Однако после выхода в свет публикации по физико-химическим свойствам ЩФ из морской бактерии Halomonas marina научно-производственные фирмы из Англии, Дании и Бельгии запрашивали данный фермент, а также генетический материал для создания рекомбинантного белка с целью коммерциализации. Однако нами самостоятельно была установлена полная аминокислотная последовательность белка, методами генной инженерии подтверждена его мономерная структура, что дает преимущество перед другими ЩФ в получении рекомбинантных аналогов с направленными свойствами. Разработка методов получения рекомбинантных ЩФ морской бактерии Halomonas marina и создание штаммов-суперпродуцентов позволит наладить широкомасштабное производство на благо многих отраслей как в нашей стране, так и за рубежом.

5. Наличие собственных запатентованных решений: Имеется патент РФ № 2077577 по способу выделения и очистки щелочной фосфатазы из морской бактерии Halomonas marina.

6. Стадия, на которой находится разработка: ОКР.

7. Схема коммерциализации разработки: создание производства.

8. Требуемый размер финансировании для успешной коммерциализации:

30000000 (тридцать миллионов) рублей.